在科研规模，准确测定大鼠体内维生素 D3（VD3）的含量关于深刻征询相关生理机制至关焦灼。大鼠维生素 D3（VD3）定量检测试剂盒（ELISA）为科研责任者提供了一种可靠的检测器具。

践诺旨趣

本试剂盒遴选竞争 ELISA 法进行检测。事先包被维生素 D3（VD3）抗体的微孔板就像一个 “检测平台”，在这个平台上，样本 / 校准品和 Asaay Diluent 秩序加入。经过温育和洗涤要领后，再加入 SA - HRP 赓续温育。再次洗涤后，加入底物 TMB 进行显色反映。在室温下，TMB 显色完成后，加入间隔液间隔反映，此时就不错读取 OD 值了。真谛真谛的是，OD 值的高下与样品中的维生素 D3（VD3）含量呈负相关关系。本试剂盒具有诸多优点，如聪惠度高、特异性强、重迭性好，操作进程浅易且快速，省略可靠地检测出血清中维生素 D3（VD3）的增减变化。

张开剩余85%试剂盒截止性 本试剂盒仅用于科研方针，绝弗成用于临床会诊。 请在试剂盒标示的有用期内使用，逾期居品切勿使用。 严禁与其他厂家的试剂盒或组分夹杂使用。 若样品需要稀释，可使用 PBS（PH7.4）进行稀释。 若样本值高于最高尺度品浓度值，需将样本适合稀释后再再行测定。 待测样本中可能存在的异嗜抗体可能会打扰检测效果，检测前务必摈弃该身分。 通过其他方法获取的检测效果与本试剂盒测定效果不具有顺利可比性。 时间教导 夹杂卵白溶液时，要尽量幸免产不悦泡，以免影响践诺效果。 加校准品与样本时，每个校准品浓度和样本王人要更换移液枪头，群众组分应遴选悬臂加样的方式，防护交叉玷辱。 合适的温育时候和充分的洗涤要领是保证践诺效果准确性的必要条目，务必严格按照要求操作。 使用自动洗板机时，加入一个 30 秒浸泡的要领，有助于擢升检测精度。 底物溶液精深应为无色液体，若在保存进程中变为蓝色，评释底物溶液照旧失效，不可再使用。 间隔液的加样国法应与底物溶液加样国法一致，加入间隔液后，蓝色的底物产物会飞快变为黄色。 践诺顶用剩的板条，应立即放回自命袋中密封，在低温干燥的环境下保存。 通盘液体组分在使用前要充分摇匀，而且严格按照评释书表明的时候、加样量及加样国法进行温育操作。 试剂盒组分与保存

未开封的试剂盒应保存在 2 - 8 度的环境中，逾期试剂盒严禁使用。本试剂盒包含以下组分：

校准品：0.5ml / 管 * 6 管，由抗原配制的 6 个浓度尺度品，浓度秩序为 48、24、12、6、3、0ng/mL。 包被微孔板：有 96T/48T 两种规格，预包被固相抗体。 SA - HRP：12mL，为 HRP 符号物。 Asaay Diluent：12mL，用于差异 VD3 与邻接卵白。 TMB：12mL，TMB 责任液。 间隔液：12mL，2mol/L 稀释液。 20× 浓缩洗涤液：30mL，含 0.15% Tween20 的 PBS。 评释书：1 份。 自命袋：1 个。 不干胶：2 片。

需要真贵的是，本品必须按照具有潜在感染性的物品进行处理，处理进程应罢免通用的安全措施。

其他用品

为获胜完成践诺，还需准备以下物品：

酶标仪（450nm） 精密移液器及一次性吸头 蒸馏水 洗瓶或者自动洗板机 37℃水浴锅或恒温箱 500ml 量筒 生物安全 检测进程必须适当践诺室经管规范的规定，严格防护交叉玷辱，通盘样品、洗弃液和各式毁灭物王人应按照传染物进行经管。 试剂盒的液体组分中含有 proclin - 300 防腐剂，可能会引起皮肤过敏反映，操作时应幸免吸入烟雾以及与皮肤战斗。 底物液对皮肤、眼睛和上呼吸谈有刺激作用，务必幸免吸入烟雾。 践诺进程中应戴上防护手套，践诺完成后要透彻洗手。 样品的集结和储存样本类型和集结

以下是样品集结的一般指南，通盘样本集结进程中严禁使用叠氮钠作念为防腐剂。

细胞培养上清：在 4000rpm 条目下离心 20min，去除细胞颗粒和团聚物，将上清液保存在 - 20℃以下，幸免反复冻融。 血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作进程中幸免任何细胞刺激，在 4000rpm 条目下离心 20min，留神肠差异出血清，保存在 - 20℃以下，幸免反复冻融。 血浆：可使用肝素、EDTA 或柠檬酸钠当作抗凝剂。在 4000rpm 条目下离心 20 分钟取上清，血浆雷同保存在 - 20℃以下，幸免反复冻融。 组织：用预冷的 PBS (0.01 M,pH = 7.4) 冲洗组织，去除残留血液，称重后将组织剪碎。按照 1: 9 的分量体积比（可左证践诺需要适合融合，并作念好纪录，推选在 PBS 中加入卵白酶扼制剂），将剪碎的组织与 PBS 加入玻璃匀浆器中，在冰上充分研磨。为进一步裂解组织细胞，可对匀浆液进行超声落空或反复冻融。终末将匀浆液在 5000×g 离心 5 - 10 分钟，取上清检测。 样本保存和踏实性

样本在 2 - 8℃条目下，不错储存 72h；若在 - 20℃条目下，则可储存 6 个月。若样本集结后弗成一次检测完，应按一次用量分装冻存，幸免反复冻融。使用时在室温下解冻，确保样品均匀充判辨冻。

磨练方法操作措施 将各式试剂移至室温均衡两小时。取浓缩洗涤液，左证当批检测数目，用蒸馏水按 1：20 的比例稀释，充分混匀后备用。 从密封袋中取出预包被板，建造一个空缺对照孔，此孔不加任何液体。每个校准品设 2 孔，每孔加入对应校准品 15μl；其余每个检测孔顺利加入待测血清或质控品 15μl。 除空缺孔外，通盘孔加入 Asaay Diluent 100μl，轻轻混匀后，贴上封板膜，摈弃在 37℃环境中温育 60 分钟。 洗板操作： 手工洗板：弃去孔内液体，用洗涤液注满各孔，静置 10 秒后甩干，重迭 3 次，终末拍干。 洗板机洗板：礼聘洗涤 3 次的措施洗板后拍干。 每孔加入 SA - HRP 100μl（空缺对照孔以外），混匀后，再次贴上封板膜，置于 37℃温育 30 分钟。 重迭第 4 步的洗板操作。 每孔加入 TMB 100μl，漂流混匀后，摈弃在 37℃避光环境中显色 15 分钟。之后，每孔加入间隔液 100μl。使用酶标仪读数，礼聘波长 450nm，先用空缺对照孔调零点，然后测定各孔光密度值（OD 值）。 手工洗板：弃去孔内液体，用洗涤液注满各孔，静置 10 秒后甩干，重迭 3 次，终末拍干。 洗板机洗板：礼聘洗涤 3 次的措施洗板后拍干。 效果筹画

检测完成后，以尺度品浓度当作纵坐标，对应的吸光度（OD 值）当作横坐标，足下筹画机软件，遴选四参数 Logistic 弧线拟合（4 - pl）的方法，创建尺度弧线方程。通过样本的吸光度（OD 值）南宫28(中国)官方网站，足下该方程筹画出样品的浓度值。若样品被稀释，通过上述方法测得的浓度值需乘以稀释倍数，才是样品的最终浓度。（暗意图仅供参考）

试剂盒性能标的 物感性能：液体组分应澄澈，无千里淀或絮状物；通盘组分应无包装防碍，各组分装量不少于组分表中要求。 剂量反映弧线线性：用四参数 Logistic 弧线拟合（4 - pl），剂量 - 反映弧线相关联数（r）的足够值应不低于 0.9900。 精密度： 批内精密度：对三组已知的高、中、低浓度样品，在归拢个板块内进行二十次精度评估，批内变异总共 CV% 小于 15%。 批间精密度：对三组已知的高、中、低浓度样品，在不同板块内进行二十次精度评估，批间变异总共 CV% 小于 15%。 聪惠度：最低检出限应不高于 0.1ng/mL。 回收率：对三组已知的高、中、低浓度样品，在归拢个板块内进行五次回收率评估，回收率在 85% - 115% 之间。 踏实性：在 2℃ - 8℃保存，有用期为 6 个月。 检测范围：3 ng/mL – 48 ng/mL 批内精密度：对三组已知的高、中、低浓度样品，在归拢个板块内进行二十次精度评估，批内变异总共 CV% 小于 15%。 批间精密度：对三组已知的高、中、低浓度样品，在不同板块内进行二十次精度评估，批间变异总共 CV% 小于 15%。 发布于：湖北省